經(jīng)典ppt課件：醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測
單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,.,*,器材準(zhǔn)備,1,.,器材準(zhǔn)備1.,自然界中的微生物,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬5千種，被認(rèn)為非常危險(xiǎn)的有600種，在人間傳染的病原微生物380種這些微生物存在于地球的各個角落，從寒冷的極地到炎熱的赤道，從4.2千米地層深處到85千米高空（芽孢）,均有它們的蹤跡空氣、水、土壤、人體的體表以及與外界相通的腔道，均有不同種類和數(shù)量的微生物存在存在于人體消化道的,細(xì)菌,超過800種，數(shù)量可達(dá)100萬億（10,14,），菌體重量11.5公斤2,.,自然界中的微生物已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬5千種，被認(rèn)為非常,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三,(P,38,),空氣與人體體表細(xì)菌學(xué)檢查,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P,38,手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P,41,3,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三(P38)空氣與人體體表細(xì)菌,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P,38,空氣是人類賴以生存的環(huán)境之一，也是重要的疾病傳播媒介空氣中的病原菌主要來自病人的排泄物和分泌物這些污物，因風(fēng)吹，以及人類日?；顒樱詺馊苣z的形式懸浮于空中，使空氣受到污染環(huán)境：不利于微生物生長。
種類：主要是病毒、真菌和細(xì)菌在醫(yī)院，公共場所致病菌的數(shù)量比較多作用：可迅速全球傳播危害：引起培養(yǎng)基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道傳染病4,.,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38 空氣是人類賴以生,實(shí)驗(yàn)方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培養(yǎng)基表面；培養(yǎng)以后，計(jì)數(shù)菌落形成單位（colony forming unit，CFU），了解空氣的污染情況實(shí)驗(yàn)步驟：每組1塊平板，選擇采樣地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室、宿舍、衛(wèi)生間、飯?zhí)没蛉芜x地點(diǎn)），將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁，平板暴露于空氣中15分鐘，然后蓋上蓋子，作標(biāo)記37溫箱培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果CFU/m,3,50000N,AT86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù)A：平板面積(平方厘米)T：采樣時間(分鐘)5,.,實(shí)驗(yàn)方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查,組號,地點(diǎn),時間(min),菌落形成單位(CFU),1,衛(wèi)生間,15,2,食堂,15,3,門診大廳,15,4,呼吸科病房,15,5,呼吸科ICU,15,6,外科病房,15,7,外科ICU,15,8,外科治療室,15,9,嬰兒室,15,10,實(shí)驗(yàn)室,15,6,.,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號地點(diǎn)時間(min)菌落形成單位(CFU),手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P,41,在日常生活中，手的接觸范圍廣，使用頻率高，受到污染的機(jī)會也最多。
一只外觀比較“干凈”的手，可攜帶10萬個細(xì)菌、200多種病毒因此，經(jīng)手傳播的疾病很多，范圍很廣，包括腸道傳染病、部分呼吸道傳染病、皮膚傳染病，以及一切可經(jīng)手間接傳播的疾病常住菌：,存在于皮膚表面、毛囊和皮脂腺種類和數(shù)量比較恒定附著在皮膚上比較牢固，用一般洗手方法，常不易去除暫住菌：,存在于皮膚表面經(jīng)常暴露的部位暫住菌是外來的非正常菌群，種類和數(shù)量不定引起人類致病的通常是暫住菌7,.,手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P41 在日常生活中，,醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都有傳播病菌的可能雖然病菌的直接來源是患者,但是造成病菌擴(kuò)散的主要途徑則是氣溶膠和醫(yī)務(wù)人員的手因此，經(jīng)常洗手和消毒是控制醫(yī)院內(nèi)交叉感染的主要方法實(shí)際上，預(yù)防感染措施中，最簡單又十分有效的方法就是洗手據(jù)測定，只用自來水洗手可使,暫住菌,總數(shù)減少40%，用肥皂洗手可減少80%以上洗手？,8,.,醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都,常規(guī)的洗手方法,（甲和丙操作）,將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液反復(fù)搓揉雙手，搓揉時間不應(yīng)少于 30秒用流水沖洗干凈，整個洗手過程不少于1分鐘能有效地去除大多數(shù)手上的暫住菌。
9,.,常規(guī)的洗手方法（甲和丙操作）將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,標(biāo)準(zhǔn)洗手方法,（乙和丁操作）,用流動的水沖洗，將手充分浸濕，涂抹肥皂、洗滌液分別搓擦1015次保持雙手低于肘部，,流水沖洗一分鐘以上1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯掌心對手背搓擦 3.手指交錯掌心對掌心搓擦,4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,10,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)洗手方法（乙和丁操作）用流動的水沖洗，,1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯掌心對手背搓擦 3.手指交錯掌心對掌心搓擦,4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,11,.,1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯,醫(yī)務(wù)人員洗手指征,接觸傳染病患者之后接觸攜帶多耐藥性細(xì)菌的病人之后接觸病人的血液、體液、分泌物和排泄物之后接觸高危病室兩個病人之間、新生兒室兩個新生兒之間接觸舊錢幣之后上廁所,前,后進(jìn)行微生物操作或作血、尿等生化、免疫測定之后在施行各種手術(shù)前后診斷、治療、護(hù)理特別易感染的病人之前進(jìn)食之前12,.,醫(yī)務(wù)人員洗手指征接觸傳染病患者之后12.,1,3,2,4,1,3,2,4,手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查,第1格為洗手前，,第2格為洗手后，,第3格為消毒后，,第4格空白對照。
2人1塊平板,上:甲、丙常規(guī)洗手,下:乙、丁標(biāo)準(zhǔn)洗手,甲（丙）,乙（?。?丙,丁,13,.,1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一,(P,2,),膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（二）,臨床標(biāo)本的檢查程序,細(xì)菌的分離與培養(yǎng)P,7,目的要求：掌握分離、純化微生物的基本操作技術(shù)14,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一(P2)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌,常見病原性球菌的檢查程序P47：,直接涂片、革蘭染色、鏡檢,膿汁、痰、咽部分泌物 觀察菌落性狀、溶血性、色素,血瓊脂平板培養(yǎng) 涂片染色鏡檢,挑取可疑菌落 生化反應(yīng),純培養(yǎng) 動物實(shí)驗(yàn),藥敏實(shí)驗(yàn),血液、穿刺液 肉湯增菌培養(yǎng) 培養(yǎng)液涂片染色境檢,常見腸道致病菌的檢查程序P48：,糞便 SS瓊脂、伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng) 挑取可疑菌落,血清學(xué)鑒定,血、骨髓 增菌培養(yǎng) 雙糖鐵培養(yǎng)基 染色鏡檢,生化反應(yīng),15,.,常見病原性球菌的檢查程序P47：15.,平板劃線分離法：,借助于劃線，將混雜的,多種,細(xì)菌，在固體培養(yǎng)基表面分散成,單個,細(xì)菌，并固定在某一點(diǎn)上培養(yǎng)以后細(xì)菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)在固體培養(yǎng)基表面或基內(nèi)，由單個細(xì)菌在局部位置不斷增值的稠密群體稱為,單菌落,。
在固體培養(yǎng)基表面，由多個菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物,稱為,菌苔,16,.,平板劃線分離法：16.,平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）,接種環(huán)燒灼滅菌，以免污染標(biāo)本取標(biāo)本在平板表面上方密集涂布510mm,2,燒掉接種環(huán)上多余的標(biāo)本（火焰背面烤干燒灼）晃動平板，當(dāng)看到平板表面象鏡面有反光的時候，保持這個角度，劃線時就能看清劃線痕跡，以便控制劃線接種環(huán)與平板呈3040度角，通過密集涂布部分13次，使接種環(huán)重新沾上少量標(biāo)本(細(xì)菌)，然后在平板表面，以曲線的形式，作大幅度來回連續(xù)劃線，邊劃邊退，線段要劃得長而密集，每區(qū)劃線不少于30條轉(zhuǎn)動平板，接種環(huán)通過第一區(qū)1次，同樣的方法劃第二區(qū)如此依次劃完3,5區(qū)接種環(huán)燒灼滅菌,（火焰背面烤干燒灼）,，以免污染環(huán)境將平板倒置（蓋在下，底朝上），37,培養(yǎng)1824h,要充分利用平板面積，5區(qū)間隔盡量小，不能劃破瓊脂17,.,平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）17.,510mm,2,30條線,平板劃線不少于150條線,18,.,510mm2 30條線平板劃線不少于150條線18.,平板劃線分離法P,8,甲膿汁標(biāo)本普通平板（黃色）,乙膿汁標(biāo)本普通平板,丙糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)（紫色）,丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán),19,.,平板劃線分離法P819.,實(shí)驗(yàn)分組,倆倆相對,4人為,一組,組號編在電源插座上。
每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁甲 乙,4,丙 丁,甲 乙,3,丙 丁,甲 乙,2,丙 丁,甲 乙,1,丙 丁,甲 乙,5,丙 丁,甲 乙,8,丙 丁,甲 乙,7,丙 丁,甲 乙,6,丙 丁,甲 乙,10,丙 丁,甲 乙,9,丙 丁,講,臺,20,.,實(shí)驗(yàn)分組倆倆相對4人為一組,組號編在電源插座上甲,接種環(huán)燒灼滅菌,使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可使用后，先在火焰,背面將,把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境金屬桿快速通過火焰2,3次，殺滅表面微生物,21,.,接種環(huán)燒灼滅菌使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒,接種環(huán)直徑3mm,環(huán)面,垂直,離開液面：快速3ul,慢速1ul環(huán)面,水平,離開液面：快速6ul,慢速2ul22,.,接種環(huán)直徑3mm環(huán)面垂直離開液面：快速3ul,慢速1ul環(huán),23,.,23.,24,.,24.,接種環(huán)與平板接觸點(diǎn)和劃線方法？,25,.,接種環(huán)與平板接觸點(diǎn)和劃線方法？25.,26,.,26.,510mm,2,30條線,平板劃線不少于150條線,27,.,510mm2 30條線平板劃線不少于150條線27.,37培養(yǎng)24小時,28,.,37培養(yǎng)24小時 28.,37培養(yǎng)24小時,29,.,37培養(yǎng)24小時 29.,37培養(yǎng)24小時,30,.,37培養(yǎng)24小時 30.,37培養(yǎng)24小時,31,.,37培養(yǎng)24小時 31.,安全警告,接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。
氣溶膠粒徑100um沉降很快，50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開，5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡Pike博士對實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的實(shí)驗(yàn)時應(yīng)坐著，,在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，,保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，,以免感染病原菌,32,.,安全警告接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒3,思考題,為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?,為什么金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見的重要病原菌?,為什么接種環(huán)使用前后必須燒灼滅菌？忽略了有什么危害?,做細(xì)菌培養(yǎng)時，平板為什么要倒置?,培養(yǎng)細(xì)菌的常用方法有哪些?,從臨床標(biāo)本中分離病原菌，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?,33,.,思考題為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?33.,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P,38,普通平板(1組1塊）,手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P,41,普通平板(2人1塊 劃分8格）,平板劃線分離法P,8,甲，乙膿汁標(biāo)本普通平板(黃色，1人1塊）,丙，丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)(紫色，1人1塊）,34,.,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P3834.,常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤試管架上器材：按接種針、接種環(huán)、油性筆和打火機(jī)的順序，分別放置在試管架中間兩行，靠近電源插座一側(cè)。
器材使用以后，必須放回原處，依次擺整齊35,.,常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤35.,酒精棉球,碘酒棉球,鑷子,電爐、石棉網(wǎng),手套,微生物學(xué)公共器材柜-2,（東側(cè)邊臺中段）,36,.,酒精棉球碘酒棉球鑷子電爐、石棉網(wǎng)手套微生物學(xué)公共器材柜-23,實(shí)驗(yàn)室器材 整齊有序,37,.,實(shí)驗(yàn)室器材 整齊有序37.,。
